C1GALT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403509-ACT

C1GALT1 codifica a β1,3-galactosiltransferase 1 do core 1, uma enzima-chave localizada no complexo de Golgi, necessária para a extensão de O-glicanos do tipo mucina ao converter o antígeno Tn (GalNAc-Ser/Thr) na estrutura core 1 (antígeno T). Por meio dessa atividade, a C1GALT1 molda a composição de glicoproteínas na superfície celular e secretadas, influenciando a ligação a lectinas, a organização de receptores e a resistência a proteases em contextos epiteliais e hematopoiéticos. Alterações na função de C1GALT1 perturbam processos dependentes de O-glicosilação, incluindo adesão e migração celular e reconhecimento imune, e estão associadas à remodelação de glicanos observada em fenótipos ligados à inflamação e ao câncer. Como um nó central nas vias de O-glicosilação, C1GALT1 é frequentemente estudada em relação à biologia de mucinas, à função de barreira e a alterações glicoproteômicas que modulam microambientes de sinalização.

C1GALT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C1GALT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C1GALT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C1GALT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C1GALT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C1GALT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C1GALT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C1GALT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C1GALT1 em células tumorais com expressão de C1GALT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.