C19orf66 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408037-ACT

C19orf66 codifica uma proteína induzida por interferão (também conhecida como shiftless, SHFL) que restringe a replicação de diversos vírus ao modular a tradução do RNA viral e alterar a acumulação de proteínas virais. Participa na sinalização imunitária inata a jusante do interferão do tipo I e contribui para programas efetores antivirais que reconfiguram o metabolismo do RNA e a síntese proteica em células infetadas. O C19orf66 tem sido associado a vias que controlam a estabilidade do RNA e o controlo translacional, e a sua atividade cruza-se com respostas celulares ao stress que influenciam as interações hospedeiro–patógeno. A desregulação de redes de genes estimulados por interferão, incluindo o C19orf66, é relevante para estudos sobre inflamação crónica, suscetibilidade viral e fenótipos de doença associados ao sistema imunitário.

C19orf66 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C19orf66 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C19orf66 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C19orf66 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C19orf66, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C19orf66. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C19orf66 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C19orf66 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C19orf66 em células tumorais com expressão de C19orf66 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.