Plásmido CRISPR de Activación (h) C18orf34: sc-415693-ACT

CCDC178 codifica la proteína humana C18orf34, un factor que contiene dominios coiled-coil con una anotación funcional limitada y que se predice que participa en redes de interacción proteína‑proteína y en la organización subcelular. Las proteínas coiled-coil suelen contribuir a la dinámica del citoesqueleto, los procesos centrosómicos, el tráfico vesicular y el ensamblaje de complejos multiproteicos, lo que hace que C18orf34 sea relevante para estudios sobre la arquitectura celular y la coordinación de señales. Conjuntos de datos transcriptómicos y proteómicos emergentes implican cambios en la expresión de C18orf34 en estados celulares asociados a enfermedad, incluidos programas de proliferación y respuesta al estrés alterados, aunque aún falta definir vínculos mecanísticos directos. Estas características hacen de CCDC178 una diana útil para investigar la regulación génica dependiente del contexto y la remodelación de vías aguas abajo en modelos celulares humanos.

C18orf34 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCDC178 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C18orf34 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCDC178 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCDC178, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C18orf34. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCDC178 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C18orf34 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C18orf34 en células tumorales con expresión de CCDC178 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.