C16orf74 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408367-ACT

C16orf74は、機能注釈が限られており十分に特徴づけられていないヒトタンパク質をコードしており、現時点の証拠からは、文脈依存的に遺伝子発現や細胞状態の調節に関与する可能性が示唆されています。トランスクリプトレベルの研究では、組織や実験系によってC16orf74の発現が変動することが報告されており、分化やストレスに関連する転写プログラムを探索するためのマーカーとしての利用を支持しています。決定的な経路上の位置づけはなお不完全ですが、C16orf74は、増殖・生存シグナル・細胞アイデンティティに結び付く共制御ネットワークを同定する目的で、マルチオミクスデータセットにおいて頻繁に評価されています。発現変動は疾患関連の発現シグネチャでも指摘されており、臨床的有用性を意味するものではないものの、細胞モデルにおける機序解析研究の標的として有用です。

C16orf74 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C16orf74の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C16orf74 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C16orf74 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC16orf74転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C16orf74の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC16orf74遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC16orf74依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC16orf74発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC16orf74経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。