C15orf39 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412724-ACT

C15orf39は、機能アノテーションが限られており十分に解明されていないヒトタンパク質をコードしていますが、得られているエビデンスからは、遺伝子発現の制御やタンパク質代謝（タンパク質ターンオーバー）といった、基本的な細胞恒常性維持プロセスに関与する可能性が示唆されています。トランスクリプトームおよびプロテオームの観察結果は、細胞の状況に応じて、C15orf39が細胞周期の進行、ストレス応答、ならびにミトコンドリア／代謝適応に影響する経路に関与し得ることを示しています。C15orf39の発現変動は一部の疾患関連データセットで報告されており、増殖制御の破綻やゲノム維持プログラムの異常との関連が示唆されます。そのため、C15orf39を制御下で過剰発現させることは、ヒト細胞モデルにおける下流の転写ネットワークや経路依存性を検証するうえで有用です。

C15orf39 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C15orf39の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C15orf39 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C15orf39 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC15orf39転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C15orf39の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC15orf39遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC15orf39依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC15orf39発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC15orf39経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。