C12orf57 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408545-ACT

C12orf57は、十分に特徴づけられていない小型のヒトタンパク質をコードしており、細胞の基本的な恒常性維持に関与することが示唆されています。近年では、神経発生やストレス応答過程における役割を示す証拠も蓄積しつつあります。分子パートナーや経路上での位置づけについては現在も精力的に研究が進められているものの、C12orf57の用量（発現量）の変化は神経発達に関連する表現型や症候群性疾患の臨床像と関連づけられており、分化した組織における適切な遺伝子制御が必要であることを支持します。C12orf57の転写制御は、細胞運命決定、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）、および細胞内シグナル伝達ダイナミクスを司るより広範なプログラムと交差している可能性があります。これらの特徴により、C12orf57は、発現のわずかな変化が神経生物学や発生生物学に関連する細胞表現型へどのように影響するかを検討するうえで有用な遺伝子座となります。

C12orf57 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C12orf57の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C12orf57 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C12orf57 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC12orf57転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C12orf57の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC12orf57遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC12orf57依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC12orf57発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC12orf57経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。