c-Rel Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422641-ACT

Rel codifica c-Rel, un membro della famiglia di fattori di trascrizione NF-κB che regola programmi di espressione genica inducibile responsabili dell’attivazione, della proliferazione e della sopravvivenza delle cellule immunitarie nei tessuti murini. In seguito a stimolazione da parte di recettori dell’antigene, recettori Toll-like o citochine, c-Rel contribuisce alla segnalazione canonica di NF-κB a valle della degradazione di IκB mediata da IKK, consentendo risposte trascrizionali nucleari. c-Rel è particolarmente rilevante nella differenziazione dei linfociti e nelle reti trascrizionali infiammatorie, in cui un’attività alterata può rimodellare la produzione di citochine e l’omeostasi immunitaria. La segnalazione Rel/c-Rel deregolata è spesso studiata nel contesto di infiammazione di tipo autoimmune, risposte alle infezioni e stati trascrizionali oncogenici nelle linee ematopoietiche.

c-Rel Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Rel senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

c-Rel Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Rel nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Rel, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di c-Rel. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Rel nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da c-Rel nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via c-Rel nelle cellule tumorali con espressione di Rel silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.