C/EBP ζ CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419622-ACT

Cebpzは転写因子C/EBP zeta（C/EBPζ）をコードしており、細胞増殖の制御、分化、ストレス応答性転写に関与する遺伝子発現プログラムを調節するCCAAT/エンハンサー結合タンパク質（C/EBP）ファミリーの一員である。C/EBPζは他のbZIP因子と協調してプロモーターおよびエンハンサー活性を微調整することで、状況依存的な調節因子として機能し得て、細胞外からのシグナルをRNAポリメラーゼIIによる転写の変化へと結び付ける。マウス系では、C/EBPζ活性の変化は、C/EBPファミリーのネットワークがサイトカインや成長因子経路と交差する場面における炎症シグナル、代謝適応、細胞運命決定の研究と関連している。これらの特性によりCebpzは、臨床的な転帰を示唆することなく、疾患関連の細胞モデルで観察される表現型変化の基盤となる転写回路を解明するための有用な結節点となる。

C/EBP ζ CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cebpzの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C/EBP ζ CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cebpz 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCebpz転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C/EBP ζの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCebpz遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC/EBP ζ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCebpz発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC/EBP ζ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。