Date published: 2026-10-29
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The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
Cas9n Nickase gRNA Plasmid Targeting: Dual gRNA plasmids create single-strand nicks at precise DNA sequences for efficient genome editing using Cas9n Nickase.
Cas9n Nickase gRNA Plasmid Targeting: Dual gRNA plasmids create single-strand nicks at precise DNA sequences for efficient genome editing using Cas9n Nickase.
This image illustrates the Cas9n Nickase mechanism used for precise genome editing. Two plasmids (Plasmid 1 and Plasmid 2) are shown, each containing a targeted DNA sequence. The system utilizes single-guide RNAs (sgRNA) to direct Cas9n Nickase to specific genomic locations, represented by the blue and pink DNA strands. The sgRNA scaffold aids in guiding Cas9n to the 20 nucleotide (nt) target sequence on the DNA. Cas9n makes single-strand cuts at NCC and NGG sites, enabling precise gene modifications without creating double-strand breaks.
This image illustrates the Cas9n Nickase mechanism used for precise genome editing. Two plasmids (Plasmid 1 and Plasmid 2) are shown, each containing a targeted DNA sequence. The system utilizes single-guide RNAs (sgRNA) to direct Cas9n Nickase to specific genomic locations, represented by the blue and pink DNA strands. The sgRNA scaffold aids in guiding Cas9n to the 20 nucleotide (nt) target sequence on the DNA. Cas9n makes single-strand cuts at NCC and NGG sites, enabling precise gene modifications without creating double-strand breaks.
The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.

C/EBP ε Double Nickaseプラスミド (h): sc-402310-NIC

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  • 対象生物種: human
  • 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
  • C/EBP ε Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
  • ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
  • ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
  • C/EBP εダブルニカースプラスミド（h）およびC/EBP εダブルニカースプラスミド（h2）は、CEBPEを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
  • トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: C/EBP ε 抗体 (C-10): sc-515192
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    注文情報

    製品名カタログ #単位価格数量お気に入り

    C/EBP ε Double Nickaseプラスミド (h)

    sc-402310-NIC
    20 µg
    		$410.00

    C/EBP ε Double Nickaseプラスミド (h2)

    sc-402310-NIC-2
    20 µg
    		$410.00

    CEBPEはC/EBPεをコードしており、C/EBPεは系譜特異的に発現するbZIP型転写因子である。C/EBPεは、好中球の分化、顆粒形成、終末成熟に必要な遺伝子プログラムを制御することで、顆粒球系造血の後期段階を統括する。C/EBPεはCCAAT/エンハンサー配列を介してプロモーターおよびエンハンサー領域に結合し、C/EBPファミリー、PU.1、ならびにG-CSF応答性シグナルを含む骨髄系の転写ネットワークと連携して、抗菌エフェクター遺伝子や細胞周期離脱に関わる遺伝子の発現を駆動する。CEBPE依存的な転写の破綻は、好中球の発生不全および自然免疫の機能障害と関連しており、骨髄系分化のチェックポイントや好中球エフェクター経路の研究において重要である。がん生物学および造血研究の分野では、CEBPE活性の変化は、骨髄系の成熟状態や白血病状況における転写制御異常の指標としても用いられる。

    C/EBP ε ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CEBPE 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CEBPE内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CEBPEの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

    編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CEBPEが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

    研究用のみ。診断用または治療用ではありません。

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