C/EBP beta Double Nickaseプラスミド (m): sc-419623-NIC

マウスCebpbは、炎症性刺激、代謝ストレス、分化シグナルに応答して誘導される遺伝子発現プログラムを統合的に制御する、塩基性ロイシンジッパー型転写因子であるC/EBPβをコードする。C/EBPβはサイトカイン経路やToll様受容体（TLR）経路からの入力を統合し、NF-κBやSTATなどの因子と協調して、骨髄系系譜のコミットメント、急性期反応、脂肪細胞分化（アディポジェネシス）を制御する。その活性は、免疫・代謝関連遺伝子ネットワークの転写制御を介して、細胞周期制御、生存、組織リモデリングに影響を及ぼす。C/EBPβシグナルの破綻は、哺乳類モデルにおける慢性炎症、代謝機能障害、腫瘍性の転写再配線といった文脈でしばしば研究されている。

C/EBP beta ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Cebpb 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Cebpb内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Cebpbの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Cebpbが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。