BTG2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419374-ACT

Btg2 (BTG2) ist ein antiproliferativer Immediate-Early‑Regulator, der in Maus-Zellen die Progression des Zellzyklus, die Differenzierung sowie stressresponsive Transkriptionsprogramme moduliert. BTG2 ist in die transkriptionelle Kontrolle und den mRNA‑Abbau eingebunden, unter anderem über Interaktionen mit CCR4–NOT‑Deadenylase-Komplexen, und verknüpft mitogene Signale mit Veränderungen der Genexpression und einer Begrenzung des Zellwachstums. Häufig wird BTG2 im Kontext der DNA‑Schadenssignalgebung und p53‑assoziierter Antworten untersucht, wobei eine veränderte BTG2‑Aktivität die Checkpoint-Kontrolle, die Apoptoseanfälligkeit und Programme der zellulären Seneszenz beeinflussen kann. Eine dysregulierte BTG2‑Expression wurde in mehreren Modellsystemen mit onkogener Transformation und Tumorprogression in Verbindung gebracht, was BTG2 für mechanistische Studien zur Proliferationskontrolle und zu krebsassoziierten Transkriptionsnetzwerken relevant macht.

BTG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Btg2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BTG2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Btg2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Btg2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BTG2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Btg2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BTG2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BTG2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Btg2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.