BTG1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405339-ACT

BTG1（B-cell translocation gene 1）は、細胞周期の進行や細胞分化を調節する増殖抑制性の制御因子をコードしており、成長関連の転写プログラムを制御するうえで重要な役割を担います。BTG1は、CCR4–NOTデアデニラーゼ複合体を含む転写および転写後の分子機構と相互作用し、mRNAのターンオーバーに関与することで遺伝子発現の精密な調整に寄与します。免疫・造血の文脈では、BTG1はリンパ系細胞の増殖を恒常的に制御し、ストレス応答性シグナル伝達にも関与します。BTG1の発現変化やその制御ネットワークの破綻は、がん化過程との関連でしばしば研究され、とくにB細胞系悪性腫瘍の生物学および関連する転写調節異常と結び付けて議論されます。

BTG1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BTG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BTG1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BTG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBTG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BTG1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBTG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBTG1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBTG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBTG1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。