Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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BTBD4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428253
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BTBD4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico BTBD4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BTBD4 Antibody (C-5): sc-390260
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BTBD4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-428253 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Zbtb46 codifica la proteina BTBD4, un fattore contenente il dominio BTB/POZ implicato in programmi di regolazione trascrizionale che modellano l’identità cellulare e gli stati di differenziamento nei tessuti murini. In immunologia, l’espressione di Zbtb46 è ampiamente utilizzata come marcatore della linea delle cellule dendritiche classiche, e la sua attività regolatoria viene studiata nel contesto della presentazione dell’antigene, della segnalazione infiammatoria e della sorveglianza immunitaria omeostatica. Reti geniche associate a Zbtb46 alterate sono state esaminate in modelli di immunità associata al tumore e di malattie infiammatorie, in cui cambiamenti nella funzione delle cellule dendritiche possono influenzare i profili citochinici e il priming dei linfociti T. Di conseguenza, la perturbazione di Zbtb46/BTBD4 è un approccio utile per analizzare i circuiti trascrizionali che collegano differenziamento, vie dell’immunità innata e risposte al microambiente.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BTBD4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zbtb46 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zbtb46 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zbtb46 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BTBD4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zbtb46 per lo studio della segnalazione di BTBD4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Zbtb46 critici per la funzione di BTBD4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zbtb46 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal BTBD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BTBD4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zbtb46. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal BTBD4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BTBD4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zbtb46 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zbtb46 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.