BSPII CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402368-ACT

IBSP は、骨シアロプロテインII（BSPII）をコードしており、BSPII は分泌性で強い酸性を示す細胞外マトリックス糖タンパク質で、石灰化組織に豊富に存在します。BSPII はハイドロキシアパタイトに結合し、RGD モチーフを介してインテグリンと相互作用することで、細胞接着や遊走、ならびに骨基質の沈着・リモデリング過程における骨芽細胞／破骨細胞間のクロストークを支持します。IBSP の発現は骨形成に関わる転写プログラムによって制御され、フォーカルアドヒージョンや細胞外マトリックスの組織化経路と交差するバイオミネラリゼーション関連プロセスに寄与します。IBSP/BSPII の発現異常は骨代謝回転の変化と関連づけられており、骨格発生、石灰化、腫瘍—骨微小環境相互作用の研究においてマーカーとして頻繁に用いられます。

BSPII CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IBSPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BSPII CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IBSP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIBSP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BSPIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIBSP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBSPII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIBSP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBSPII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。