BRWD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415190-ACT

ヒトBRWD3は、ブロモドメインとWDリピートを含むクロマチン関連タンパク質をコードしており、アセチル化リシンの認識をクロマチンリモデリングおよびDNA鋳型依存性プロセスと連結することで、転写のエピジェネティックな制御に関与します。BRWD3は、そのブロモドメインと足場として機能するWDリピートを介して、細胞増殖、分化、ゲノム安定性に影響する遺伝子発現プログラムの制御に関わることが示唆されています。遺伝学的および機能的研究により、BRWD3の調節異常はX連鎖知的障害を含む神経発達表現型や、がん生物学に関連するより広範な転写の攪乱と関連づけられてきました。したがってBRWD3は、ヒト細胞におけるクロマチン依存的経路制御や、遺伝子型から表現型への関係を調べるうえで有用な結節点（ノード）となります。

BRWD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BRWD3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRWD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BRWD3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBRWD3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRWD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBRWD3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRWD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBRWD3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRWD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。