BRUNOL4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404263-ACT

ヒトCELF4（BRUNOL4）は、CELF/BRUNO様ファミリーに属するRNA結合タンパク質をコードしており、pre-mRNAおよび3′UTR中のU/Gリッチ配列要素を認識することで、選択的スプライシング、mRNAの安定性、翻訳を制御します。BRUNOL4は、神経分化や活動依存的な遺伝子発現を形作る転写後遺伝子制御プログラムに関与し、シナプス機能やRNAプロセシングネットワークに影響を与えます。CELF4依存的なスプライシングやmRNA恒常性の破綻は、興奮性の変化や発作感受性の増大などを含む神経発達表現型や神経疾患の機序と関連づけられています。これらの特性により、CELF4はヒト細胞モデルにおけるRNA制御経路や転写産物アイソフォーム制御を解析するための有用な標的となります。

BRUNOL4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CELF4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRUNOL4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CELF4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCELF4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRUNOL4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCELF4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRUNOL4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCELF4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRUNOL4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。