BRP44L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404976-ACT

ヒトMPC1は、ミトコンドリアピルビン酸キャリア（MPC）を構成するBRP44Lサブユニットをコードしており、ピルビン酸をミトコンドリアマトリックスへ取り込んでTCA回路および酸化的リン酸化の基質供給を担う、内膜上の重要な複合体の一部です。MPC1はミトコンドリア呼吸と細胞質の解糖系のバランスを調節することで、アナプレロシス、レドックス恒常性、ならびに生合成経路への炭素フラックスに影響します。MPC1/BRP44L活性の変化は、増殖状態で見られる代謝リプログラミングや、さまざまなモデル系におけるミトコンドリア機能不全の表現型と関連づけられてきました。そのため、MPC1はエネルギー代謝、ミトコンドリアシグナル伝達、栄養感知経路に関わる文脈で広く研究されています。

BRP44L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MPC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRP44L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MPC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMPC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRP44Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMPC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRP44L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMPC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRP44L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。