Brn-2/BRN2/POU3F2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400392

Panoramica

POU3F2 (Brn-2/BRN2) è un fattore di trascrizione della famiglia POU con dominio omeobox, che si lega a motivi octamerici per regolare programmi di espressione genica coinvolti nella specificazione di linea, nella differenziazione neuronale e nel mantenimento dell’identità cellulare. Nel sistema nervoso contribuisce allo sviluppo corticale e alle reti trascrizionali neurogeniche, mentre nelle linee derivate dalla cresta neurale coordina le transizioni tra stati differenziativi. Un’attività aberrante di POU3F2 è stata associata a circuiti trascrizionali deregolati in oncologia, in particolare nel melanoma, dove interseca lo switching di stato guidato da MAPK e i programmi associati all’invasività. In quanto regolatore nucleare, BRN2 rappresenta un nodo accessibile per studiare il controllo enhancer–promotore, l’occupazione della cromatina e il rimodellamento trascrizionale dipendente dal contesto nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Brn-2/BRN2/POU3F2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POU3F2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POU3F2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POU3F2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Brn-2/BRN2/POU3F2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POU3F2 per lo studio della segnalazione di Brn-2/BRN2/POU3F2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POU3F2 critici per la funzione di Brn-2/BRN2/POU3F2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POU3F2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Brn-2/BRN2/POU3F2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POU3F2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Brn-2/BRN2/POU3F2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Brn-2/BRN2/POU3F2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POU3F2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POU3F2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.