brevican CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402668-ACT

BCANは、脳の細胞外マトリックスおよびペリニューロナルネット（神経細胞周囲網）に豊富に存在するコンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるブレビカンをコードしており、そこで細胞―マトリックス相互作用やシナプスの構造可塑性を調節します。ブレビカンはヒアルロン酸に結合し、テネイシンRや他のマトリックス構成要素と会合することで、細胞外マトリックスの構築、神経細胞の接着、神経突起の伸長に影響を与えます。周細胞マトリックスの組織化やプロテアーゼ感受性のリモデリングの制御を通じて、BCANは神経発生や活動依存的な回路の洗練に関連する過程に寄与します。ブレビカンの発現やプロセシングの変化は、神経疾患および神経精神疾患の文脈で報告されており、グリオーマの生物学や浸潤性表現型におけるマトリックス関連因子としてもしばしば評価されています。

brevican CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCANの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

brevican CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCAN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCAN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性brevicanの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCAN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbrevican依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCAN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbrevican経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。