BRDT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416531-ACT

BRDT（bromodomain testis-associated）は、BETファミリーに属するクロマチンリーダーであり、ヒストンテール上のアセチル化リジンを認識して、精子形成および生殖細胞分化の過程における転写プログラムを制御します。クロマチンのアクセス性を調節することで、BRDTはRNAポリメラーゼII依存的な遺伝子発現、クロマチンリモデリング、減数分裂関連経路のエピジェネティック制御に影響を与えます。BRDTを含むBETタンパク質の制御異常は、がん生物学に関連する転写状態の変化と関連づけられており、ブロモドメイン依存的なエンハンサー活性や系譜プログラムが破綻することがあります。精巣で高発現し、ブロモドメインを介した相互作用が明確に定義されている因子として、BRDTはアセチル化依存的な転写制御とクロマチンダイナミクスを研究するうえで有用なモデルです。

BRDT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BRDTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRDT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BRDT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBRDT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRDTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBRDT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRDT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBRDT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRDT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。