BRCA1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419362-ACT

マウスBrca1は、BRCA1腫瘍抑制タンパク質をコードしている。BRCA1はゲノム安定性の中心的な制御因子であり、DNA二本鎖切断修復、複製フォークの保護、細胞周期チェックポイント制御を統合的に調節する。BRCA1はBARD1、PALB2、RAD51などのパートナーとの相互作用を介して相同組換えに機能し、損傷部位におけるクロマチン制御やユビキチンシグナル伝達も調節する。哺乳類細胞では、BRCA1はATM/ATR依存的なDNA損傷応答を転写・複製プログラムと連結させ、変異誘発を抑制する。BRCA1関連経路の破綻や制御異常は、生物医学研究において、ゲノム不安定性、ストレス応答、がんに関連するDNA修復欠損の機構を解析するためのモデルとして広く用いられている。

BRCA1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Brca1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRCA1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Brca1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBrca1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRCA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBrca1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRCA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBrca1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRCA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。