BRAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403847-ACT

BRAP（BRCA1関連タンパク質）は細胞質に局在するRING型E3ユビキチンリガーゼであり、経路構成因子のユビキチン化依存的な制御を統合することで、タンパク質の安定性とシグナル出力を調節します。BRAPはMAPK/ERKシグナル伝達のダイナミクスの調節に関与するとされ、ユビキチン介在性の分解回転（ターンオーバー）やシグナル減衰への影響を通じて、細胞周期進行、ストレス応答、プロテオスタシスに影響を及ぼします。シグナル伝達および炎症／ストレス経路を形作ることにより、BRAPの発現量や機能的多型は細胞恒常性の変化や、心代謝や神経変性に関連する過程を含む疾患関連表現型への感受性の変動と関連づけられています。これらの特性からBRAPは、ユビキチンリガーゼ・ネットワークがリン酸化駆動型のシグナル伝達と下流の転写プログラムをヒト細胞でどのように微調整しているかを解明するための有用な標的となります。

BRAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BRAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BRAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBRAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBRAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBRAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。