BRAF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400121-ACT

BRAFはセリン／スレオニン型プロテインキナーゼをコードしており、RAS–RAF–MEK–ERK（MAPK）シグナル伝達カスケードの主要なエフェクターとして機能し、活性化した受容体型チロシンキナーゼからのシグナルを核内の転写プログラムへ伝達する。BRAFは細胞周期の進行、分化、生存、ストレス応答を制御することで、細胞外からの刺激を状況依存的な遺伝子発現変化へと統合する。BRAF活性の異常はMAPK経路の出力を攪乱し、多様ながんモデルにおいて、がん遺伝子シグナル、細胞可塑性の変化、治療応答に関わる表現型と強く関連している。さらにMAPKシグナルはPI3K/AKT経路とクロストークし、DUSPやSPRYタンパク質などのフィードバック制御因子とも相互作用するため、BRAFは経路ダイナミクス、シグナル適応、耐性機構の研究で広く対象とされている。

BRAF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BRAFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BRAF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BRAF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBRAF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BRAFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBRAF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBRAF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBRAF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBRAF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。