bradykinin B2 R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401771-ACT

BDKRB2 codifica il recettore umano della bradichinina B2 (bradichinina B2 R), un recettore accoppiato a proteine G che lega le chinine per regolare il tono vascolare, la permeabilità endoteliale, la nocicezione e la segnalazione infiammatoria. L’attivazione del recettore coinvolge principalmente vie dipendenti da Gq/11 e Gi, stimolando la fosfolipasi C, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare, la produzione di ossido nitrico e la segnalazione a valle MAPK/ERK e PI3K, modulando risposte cellulari rapide al danno tissutale. La segnalazione mediata da BDKRB2 interagisce con l’attività del sistema callicreina–chinina e presenta cross-talk con le vie delle prostaglandine e del sistema renina–angiotensina, influenzando l’omeostasi vascolare e infiammatoria. Un’attività deregolata del recettore B2 è stata associata a fenotipi cardiovascolari e infiammatori, alla trasmissione del dolore e a processi legati all’edema, supportando studi meccanicistici in modelli di cellule endoteliali, muscolo liscio e sistemi rilevanti per l’immunità.

bradykinin B2 R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BDKRB2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

bradykinin B2 R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BDKRB2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BDKRB2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di bradykinin B2 R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BDKRB2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da bradykinin B2 R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via bradykinin B2 R nelle cellule tumorali con espressione di BDKRB2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.