brachyury CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416539-ACT

ヒトのT遺伝子は、T-box型転写因子であるブラキュリー（brachyury）をコードしており、中胚葉の指定、脊索の形成、そして後方軸の発生に不可欠である。ブラキュリーはT-boxモチーフに結合し、EMT（上皮間葉転換）関連プロセス、細胞移動、発生パターニング経路と接続する転写ネットワークを協調的に制御することで、系譜プログラムを調節する。成体の文脈では、T発現の制御異常が、複数の腫瘍タイプおよび脊索腫において観察される分化状態の変化や転写リプログラミングと関連づけられており、ブラキュリーは系譜関連マーカーおよびドライバーとしてしばしば研究されている。発生制御因子としてのブラキュリーは、ヒト細胞モデルにおける上皮―間葉転換や中胚葉系運命決定を制御する遺伝子制御回路を解析するための、扱いやすい結節点を提供する。

brachyury CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Tの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

brachyury CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における T 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性brachyuryの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbrachyury依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbrachyury経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。