BPTF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404092-ACT

BPTF（bromodomain PHD finger transcription factor）は、ヒストン修飾を読み取り、ヌクレオソームの配置を調節して転写プログラムを制御する、NURF（ATP依存性）クロマチンリモデリング複合体の中核的な制御因子をコードしています。ブロモドメインとPHDフィンガーをクロマチンリモデリング活性と結び付けることで、BPTFはエンハンサー機能、プロモーターのアクセス性、ならびに発生および細胞分化における系譜特異的遺伝子発現に影響を与えます。BPTF依存的な制御は、細胞周期の進行、DNA損傷応答、クロマチン構造の維持を司る経路とも交差しており、エピジェネティック制御の研究でしばしば注目される標的となっています。BPTFの発現や活性の破綻は、がんや神経発達関連の表現型など複数の疾患状況で観察される転写状態の変化と関連づけられており、クロマチン駆動性の病態における機序上の結節点としての重要性を示唆しています。

BPTF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BPTFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BPTF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BPTF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBPTF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BPTFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBPTF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBPTF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBPTF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBPTF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。