BORIS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403313-ACT

O CTCFL codifica o BORIS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), uma proteína de ligação ao DNA do tipo câncer-testis relacionada ao CTCF, que reconhece sequências semelhantes a isoladores e remodela a arquitetura da cromatina. O BORIS participa da regulação epigenética da transcrição por meio da modulação da atividade de promotores e enhancers, dos estados de metilação do DNA e da organização genômica de ordem superior, influenciando processos como a expressão gênica da linhagem germinativa, programas de destino celular e a acessibilidade da cromatina. A expressão aberrante de BORIS está associada à reprogramação transcricional e à expressão desregulada de redes germinativas e oncogênicas normalmente silenciadas, tornando-o um alvo útil para estudar a plasticidade epigenética e os mecanismos de controle transcricional em células humanas.

BORIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTCFL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BORIS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTCFL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTCFL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BORIS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTCFL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BORIS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BORIS em células tumorais com expressão de CTCFL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.