Bok Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407699

Panoramica

BOK (BCL2-related ovarian killer) codifica Bok, un membro pro-apoptotico della famiglia di proteine BCL-2 che contribuisce all’apoptosi intrinseca influenzando la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna e la successiva attivazione delle caspasi. Bok è stato collegato alla biologia del reticolo endoplasmatico e delle membrane associate ai mitocondri (MAM), intersecandosi con vie di risposta allo stress che integrano proteostasi e decisioni sul destino cellulare. Per questi ruoli, BOK viene studiato in contesti in cui le soglie apoptotiche e la sensibilità allo stress cellulare risultano alterate, inclusi la biologia dei tumori, la segnalazione dello stress associata alla neurodegenerazione e l’omeostasi tissutale. La sua regolazione e la sovrapposizione funzionale con altre proteine della famiglia BCL-2 lo rendono un nodo utile per analizzare la ridondanza delle vie e il “priming” apoptotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Bok (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BOK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BOK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BOK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Bok.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BOK per lo studio della segnalazione di Bok, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BOK critici per la funzione di Bok
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BOK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Bok CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Bok CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BOK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Bok Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Bok (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BOK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BOK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.