BNP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421946

Panoramica

Nppb codifica il peptide natriuretico di tipo B (BNP), un ormone cardiaco secreto la cui espressione aumenta in risposta allo stiramento miocardico e a segnali neuro-ormonali. Dopo la maturazione a partire dal proBNP, il BNP segnala attraverso i recettori dei peptidi natriuretici per stimolare l’attività della guanilato ciclasi, aumentare i livelli di cGMP e modulare il tono vascolare, la natriuresi e i programmi di rimodellamento cardiaco. Nel topo, l’espressione di Nppb è ampiamente utilizzata come readout molecolare dello stress emodinamico e dell’ipertrofia dei cardiomiociti, collegandola a vie che controllano la fibrosi, il turnover della matrice extracellulare e la segnalazione infiammatoria. Una segnalazione BNP/NP disregolata è rilevante per studi sul sovraccarico pressorio cardiaco, sui fenotipi di rimodellamento associati allo scompenso cardiaco e sull’omeostasi cardio-renale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BNP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nppb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nppb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nppb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BNP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nppb per lo studio della segnalazione di BNP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nppb critici per la funzione di BNP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nppb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BNP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BNP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nppb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BNP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BNP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nppb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nppb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.