BNIP-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400985-NIC

ヒトのBNIP3は、ミトコンドリアに局在し、低酸素および代謝ストレス下での細胞運命決定を調節する非典型的なBH3-onlyタンパク質であるBNIP-3をコードする。BNIP-3はLIRモチーフを介してLC3と相互作用し、マイトファジーを促進することでミトコンドリアの品質管理に関与するほか、状況に応じてミトコンドリア膜透過性や細胞死プログラムにも影響を及ぼしうる。その発現はHIF-1シグナル、活性酸素種（ROS）の恒常性、そして酸化的リン酸化の変化と密接に結び付いており、BNIP-3をエネルギー代謝（バイオエナジェティクス）およびストレス適応を制御するより広範な経路と関連付けている。BNIP-3活性の制御異常は、低酸素障害やミトコンドリア機能不全を伴う病態（がん生物学、虚血関連障害、神経変性など）と関連して報告されており、ストレス応答の機構研究における主要な標的の一つとなっている。

BNIP-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BNIP3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BNIP3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BNIP3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BNIP3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。