BMP-9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402887-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BMP-9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- BMP-9ダブルニカースプラスミド（h）およびBMP-9ダブルニカースプラスミド（h2）は、GDF2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: BMP-9 抗体 (H-3): sc-514211
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BMP-9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402887-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BMP-9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402887-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
成長分化因子2（GDF2）は骨形成タンパク質9（BMP-9）をコードしており、血中を循環するTGF-βスーパーファミリーのリガンドです。主にI型受容体であるALK1/ACVRL1およびALK2を介し、BMPR2とともにシグナルを伝達して、SMAD1/5/9による転写プログラムを活性化します。ヒトの内皮系および間葉系の文脈では、BMP-9は血管の静止状態、血管新生リモデリング、分化に関連する遺伝子発現の制御に寄与し、MAPKやPI3Kシグナルとの経路クロストークが細胞状態の応答に影響します。BMP-9/ALK1シグナルの破綻は、遺伝性出血性毛細血管拡張症や肺動脈性肺高血圧症などの血管病態と密接に関連しており、BMP-9活性の変化は線維化、炎症、腫瘍微小環境の生物学においても研究されています。リガンド駆動型の経路であるBMP-9は、受容体―リガンド特異性や、SMAD依存的な下流転写を、関連する初代細胞系および改変細胞系で検討するための扱いやすい軸にもなります。
BMP-9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GDF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GDF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GDF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GDF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。