BMP-8A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406589-ACT

ヒトBMP8Aは骨形成タンパク質8A（BMP-8A）をコードしており、BMP-8Aは分泌型のTGF-βスーパーファミリーリガンドとして、BMPタイプI/IIのセリン／スレオニンキナーゼ受容体を介してシグナルを伝達し、SMAD1/5/8依存的な転写プログラムを活性化します。BMP-8Aは発生パターニング、組織分化、細胞外マトリックス（ECM）リモデリングの調節に寄与し、増殖や系譜決定に影響し得るMAPK経路との下流でのクロストークも示します。細胞モデルでは、BMP8A関連シグナルは骨形成や生殖生物学の文脈で研究されることが多く、BMP経路活性の変化は形態形成の異常や線維化様の表現型と関連付けられています。リガンドの利用可能性や受容体—SMADダイナミクスを含むBMPシグナル構成要素の撹乱は、発生異常の機序解明や、経路依存的な細胞運命決定の変化を検討する研究において重要です。

BMP-8A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BMP8Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BMP-8A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BMP8A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBMP8A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BMP-8Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBMP8A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBMP-8A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBMP8A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBMP-8A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。