BMP-3 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-430986-ACT-2

マウスのBmp3は骨形成タンパク質3（BMP-3）をコードしており、BMP-3は分泌型のTGF-βスーパーファミリーリガンドとして、SMAD依存性シグナル伝達に影響を与えるとともに骨誘導性BMP経路に拮抗することで、骨形成（osteogenesis）および骨格パターン形成を調節する。BMP-3は骨組織および間質（ストローマ）コンパートメントで産生され、骨形成、細胞外マトリックス沈着、ならびに間葉系系譜細胞の分化制御に寄与し、軟骨と骨の恒常性維持に関わるより広範なプログラムと結び付いている。Bmp3/BMP-3活性の変化は、低骨量、骨折治癒不全、頭蓋顔面の発生異常といった表現型との関連が報告されており、筋骨格系疾患モデルにおける機序解明上の重要な結節点としての有用性を支持する。マウス系においてBmp3を遺伝子編集または摂動することで、TGF-β/BMPネットワーク間のクロストーク、細胞系譜のコミットメント、ならびに組織リモデリングを、発生生物学および骨格生物学研究の文脈で検討できる。

BMP-3 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Bmp3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BMP-3 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Bmp3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBmp3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BMP-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBmp3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBMP-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBmp3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBMP-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。