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BMP-3 CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-404417-ACT | 20 µg | $397.00 |
BMP3は、骨微小環境において骨芽細胞系および軟骨細胞系の分化を調節する、TGF-βスーパーファミリーに属する分泌型タンパク質である骨形成タンパク質3(BMP-3)をコードしています。多くの骨誘導性BMPとは異なり、BMP-3は一般にBMP依存性シグナル伝達の拮抗因子として説明され、SMAD依存的な転写プログラムや細胞外マトリックスのリモデリングに影響を及ぼします。これらの経路間相互作用を通じて、BMP-3は骨格発生、骨密度恒常性、ならびに間質細胞の運命決定の制御に寄与します。BMP3発現の変化は、異常なミネラル化や組織リモデリングを伴う状況で報告されており、筋骨格系および間質生物学の機序研究において重要な対象となります。
BMP-3 CRISPR活性化プラスミド(h)は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BMP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
BMP-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BMP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異(D10AおよびN863A)を有する、触媒活性のないCas9(dCas9)を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBMP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BMP-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBMP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBMP-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBMP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBMP-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。