BMP-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400514

Panoramica

BMP2 codifica la proteina morfogenetica dell’osso 2 (BMP-2), un ligando secreto appartenente alla superfamiglia del TGF-β, che segnala principalmente attraverso recettori di tipo I/II con attività chinasica serina/treonina per attivare SMAD1/5/8 e intersecarsi con le vie MAPK. BMP-2 regola la differenziazione osteogenica e condrogenica, il rimodellamento della matrice extracellulare e il patterning dello sviluppo, influenzando le decisioni di destino cellulare nelle diverse linee mesenchimali. Una deregolazione della segnalazione di BMP2 è stata associata a ossificazione aberrante, malformazioni scheletriche e alterazioni dei segnali del microambiente tumorale che incidono su proliferazione, migrazione e programmi epitelio-mesenchimali. Per questo motivo BMP2 è ampiamente studiato in biologia dell’osso, in modelli di rigenerazione e nelle analisi del crosstalk tra vie di segnalazione TGF-β/BMP.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BMP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BMP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BMP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BMP-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BMP2 per lo studio della segnalazione di BMP-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BMP2 critici per la funzione di BMP-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BMP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BMP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BMP-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BMP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BMP-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BMP-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BMP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BMP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.