BMCP1 (UCP5) Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405051-ACT

SLC25A14 codifica a BMCP1 (também conhecida como UCP5), um transportador da membrana mitocondrial interna que contribui para o vazamento regulado de prótons e para a modulação da eficiência da fosforilação oxidativa. Ao influenciar o potencial de membrana mitocondrial, a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o acoplamento do transporte de elétrons à síntese de ATP, a BMCP1 se conecta a vias que controlam a homeostase bioenergética, as respostas ao estresse e a dinâmica mitocondrial. A UCP5 é enriquecida no sistema nervoso e tem sido associada à resiliência celular sob estresse oxidativo e metabólico, o que a torna relevante para estudos de neurodegeneração e disfunção mitocondrial. A expressão ou atividade alterada de proteínas desacopladoras também é usada como parâmetro de leitura em pesquisas sobre metabolismo, suscetibilidade à apoptose e controle de qualidade mitocondrial.

BMCP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC25A14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMCP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC25A14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC25A14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMCP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC25A14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMCP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMCP1 em células tumorais com expressão de SLC25A14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.