BMAL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435462-ACT

Arntl2 codifica o fator de transcrição BMAL2, da família basic helix–loop–helix PAS, um regulador central de programas transcricionais circadianos que forma heterodímeros com CLOCK/NPAS2 para impulsionar a expressão gênica dependente de E-box. Em células de camundongo, o BMAL2 contribui para o controle rítmico do metabolismo, da função mitocondrial, das respostas a danos no DNA e da sinalização imune por meio de redes controladas pelo relógio. Pistas temporais mediadas por Arntl2 interagem com vias como a sinalização de MAPK e NF-κB e moldam transições de estado celular sob estresse. A atividade desregulada de ARNTL2/BMAL2 tem sido associada a alterações na homeostase circadiana e tem sido estudada em contextos que incluem inflamação, disfunção metabólica e fenótipos associados a tumores.

BMAL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Arntl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMAL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Arntl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Arntl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMAL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Arntl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMAL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMAL2 em células tumorais com expressão de Arntl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.