BLOS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406776

Panoramica

BLOC1S2 codifica BLOS2, una subunità centrale del complesso 1 della biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi (BLOC-1), che coordina il traffico endosomiale e lo smistamento dei carichi. Attraverso le interazioni del BLOC-1 con i complessi di proteine adattatrici e con il macchinario di trasporto citoscheletrico, BLOS2 contribuisce al recapito delle proteine di membrana verso endosomi, lisosomi e organelli correlati ai lisosomi, influenzando la maturazione delle vescicole e l’omeostasi cellulare. L’alterazione dei componenti del BLOC-1 è stata associata a cambiamenti nell’estensione dei neuriti, nella dinamica delle vescicole sinaptiche e a difetti nelle vie della pigmentazione che dipendono da organelli specializzati come i melanosomi. Di conseguenza, BLOC1S2 viene studiato nel contesto dei disturbi del trasporto intracellulare e della neurobiologia, dove le perturbazioni della via endolisosomiale possono influire su segnalazione e proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BLOS2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BLOC1S2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BLOC1S2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BLOC1S2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BLOS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BLOC1S2 per lo studio della segnalazione di BLOS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BLOC1S2 critici per la funzione di BLOS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BLOC1S2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BLOS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BLOS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BLOC1S2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BLOS2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BLOS2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BLOC1S2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BLOC1S2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.