BLM Double Nickaseプラスミド (m): sc-419336-NIC

マウスBlmは、BLM RecQファミリーDNAヘリカーゼをコードしており、異常なDNA二次構造を解消し、正確な相同組換えを促進する、ゲノム維持に重要な因子です。BLMはBTR複合体（BLM–TOP3A–RMI1/2）と協調して、複製フォークの再始動、末端切除、二重ホリデイ接合の解消に関与し、その結果、交叉（クロスオーバー）イベントや染色体再編成を抑制します。これらの働きを通じて、BLMは複製ストレス下でのATR/CHK1シグナル伝達やファンコニ貧血ネットワークを含むDNA損傷応答経路とも連携します。BLM機能の破綻は、姉妹染色分体交換の増加、ゲノム不安定性、ならびにがん素因様の表現型と関連しており、Blmは哺乳類細胞におけるDNA修復欠損や変異プロセスを研究するための有用な遺伝子座です。

BLM ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Blm 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Blm内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Blmの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Blmが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。