BLCAM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401451-ACT

CD22（BLCAM）は、B細胞に特異的に発現するシアル酸結合性の免疫グロブリン様レクチン（Siglec）であり、B細胞受容体（BCR）の抑制性共受容体として機能して、抗原刺激により駆動されるシグナル伝達の閾値を調節します。免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ITIM）を介してSHP-1やSHIPなどのホスファターゼをリクルートし、近位キナーゼ活性およびPI3K/AKT、MAPK、カルシウムフラックスを含む下流経路を調節することで、B細胞の活性化・生存・免疫寛容の形成に影響を与えます。さらにCD22は、細胞表面での糖鎖依存的相互作用を介して、B細胞の接着や遊走（トラフィッキング）にも寄与します。CD22の発現やシグナル伝達の破綻は免疫恒常性の変化と関連し、B細胞性腫瘍や自己免疫に関連するB細胞表現型の文脈でしばしば研究されています。

CD22 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD22の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD22 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD22 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD22転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD22の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD22遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD22依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD22発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD22経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。