BLC Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424962-ACT

Cxcl13 codifica a quimiocina BLC (atrativo quimiotático de linfócitos B), um organizador central do tráfego de células B e da arquitetura dos folículos em tecidos linfoides secundários. A BLC sinaliza principalmente por meio de CXCR5 para orientar a quimiotaxia de células B e de células T auxiliares foliculares, sustentando a formação de centros germinativos, a maturação de afinidade e respostas imunes humorais coordenadas. Esse eixo integra-se a redes de quimiocinas inflamatórias, à comunicação cruzada entre células estromais e células imunes e a programas de neogênese linfoide que remodelam microambientes teciduais durante inflamação crônica. A expressão desregulada de CXCL13 é amplamente utilizada como biomarcador e como nó mecanístico em modelos de patologia autoimune, estruturas linfoides ectópicas e organização imune associada a tumores.

BLC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cxcl13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BLC O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cxcl13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cxcl13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BLC. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cxcl13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BLC no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BLC em células tumorais com expressão de Cxcl13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.