BimEL Double Nickaseプラスミド (h): sc-400515-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- BimEL Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- BimELダブルニカースプラスミド（h）およびBimELダブルニカースプラスミド（h2）は、BCL2L11を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
BimEL Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400515-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BimEL Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400515-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L11は、BH3オンリー型のアポトーシス促進タンパク質Bimをコードしており、Bim_ELアイソフォームは広く発現するスプライスバリアントとして、細胞ストレスシグナルを統合してミトコンドリア外膜透過化（MOMP）を開始します。Bim_ELは、抗アポトーシス性のBCL-2ファミリー分子を中和し、BAX/BAKの活性化を促進することで内因性アポトーシスを誘導し、成長因子の枯渇、ERストレス、細胞骨格由来の刺激をカスパーゼ活性化へと結び付けます。その活性は、転写制御（例：FOXO）、翻訳後リン酸化（例：MAPK/ERK依存的な分解制御）、および微小管ネットワークへの隔離によって調節されており、Bim_ELは生存経路と細胞死経路の接点に位置付けられます。BCL2L11を介したアポトーシス・プライミングの破綻は、がん細胞の生存、免疫恒常性の異常、細胞ストレス応答の変化に関与するとされ、アポトーシスおよび細胞運命研究における重要な結節点となっています。
BimEL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BCL2L11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BCL2L11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BCL2L11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BCL2L11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。