BIGM103 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-426620-ACT

Slc39a8 は、ZIP ファミリーに属する金属イオン輸送体をコードしており、特にマンガンなどの二価陽イオンの細胞内取り込みに関与するとされる。これにより、マウス組織における金属依存性酵素の活性や酸化還元恒常性の維持が支持される。細胞内マンガンの利用可能量を調節することで、BIGM103 は、メタロ酵素の機能や適切な補因子バランスに依存する糖鎖修飾、ミトコンドリア機能、炎症性シグナル伝達経路などのプロセスに影響を与える。Slc39a8 発現の変動は免疫応答の変化や代謝表現型と関連づけられており、微量栄養素輸送が細胞シグナルおよび全身生理とどのように接続するかを研究する上で重要である。この遺伝子は、金属恒常性の破綻や複雑形質の生物学を扱うモデルにおいて、輸送体依存的な補因子供給が下流経路の活性を再構成し得るという観点から、しばしば研究対象となっている。

BIGM103 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Slc39a8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

BIGM103 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Slc39a8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSlc39a8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性BIGM103の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSlc39a8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBIGM103依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSlc39a8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBIGM103経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。