Particules Lentivirales d'Activation (h) BID: sc-400510-LAC

Le gène humain **BID** (BH3-interacting domain death agonist) code une protéine pro-apoptotique de la famille **BCL-2** qui fait le lien entre la signalisation extrinsèque des récepteurs de mort et la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale. Après clivage par la caspase-8 en **BID tronqué (tBID)**, il favorise l’activation de **BAX/BAK**, la libération du **cytochrome c** et l’activation de cascades de caspases en aval, intégrant ainsi l’apoptose aux réponses cellulaires au stress. L’activité de BID recoupe les voies **TNF/Fas**, le contrôle de l’intégrité mitochondriale et la signalisation inflammatoire, ce qui en fait un élément pertinent pour l’étude des décisions de destinée cellulaire, de l’homéostasie immunitaire et des mécanismes de lésions tissulaires. Une régulation altérée de l’apoptose médiée par BID est fréquemment étudiée en oncologie, dans les maladies neurodégénératives et dans des modèles de pathologies hépatiques, où la signalisation de survie et l’« amorçage » mitochondrial sont perturbés.

Les particules d'activation lentivirales BID (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BID dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BID (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BID, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BID. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BID ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.