Plasmide CRISPR d'Activation (h) BF-1: sc-402933-ACT

FOXG1 code le facteur de transcription brain factor‑1 (BF‑1) humain, un régulateur de la famille forkhead qui contrôle, au cours du neurodéveloppement, la prolifération des progéniteurs du télencéphale et du cortex, le calendrier de la différenciation neuronale et la régionalisation. BF‑1 module des programmes d’expression génique liés au contrôle du cycle cellulaire et à la spécification des lignages neuronaux, en s’intégrant à des réseaux de signalisation tels que les voies TGF‑β/SMAD et les sorties transcriptionnelles dépendantes de WNT/β‑caténine. Une dérégulation du dosage ou de la fonction de FOXG1 perturbe l’équilibre excitation–inhibition et le développement synaptique, et des variants pathogènes sont associés à des troubles du neurodéveloppement, notamment le syndrome FOXG1 et des phénotypes liés à l’épilepsie. Dans des modèles cellulaires, FOXG1 constitue un nœud clé pour étudier le contrôle transcriptionnel piloté par la chromatine, les décisions de destin cellulaire et les trajectoires de maturation des cellules souches neurales et des neurones.

BF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BF-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BF-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BF-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.