Bex2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404711

Panoramica

BEX2 (brain expressed X-linked 2) codifica Bex2, una piccola proteina intrinsecamente disordinata, arricchita nei tessuti neurali e in altri tessuti, che funge da modulatore dipendente dal contesto di programmi trascrizionali e reti di interazione proteina–proteina. Le attività descritte collocano Bex2 all’interfaccia tra la segnalazione delle neurotrofine e le vie di risposta allo stress, influenzando la differenziazione neuronale, il controllo del ciclo cellulare e l’apoptosi attraverso interazioni in grado di incidere su MAPK/ERK e su segnali di sopravvivenza correlati. Un’espressione alterata di BEX2 è stata descritta in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi processi di neurosviluppo e biologia tumorale, dove è stata associata a cambiamenti nella proliferazione, nei programmi di linea cellulare e nei fenotipi di risposta ai trattamenti. Queste caratteristiche rendono BEX2 un nodo utile per analizzare l’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione e le decisioni di destino cellulare in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Bex2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BEX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BEX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BEX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Bex2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BEX2 per lo studio della segnalazione di Bex2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BEX2 critici per la funzione di Bex2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BEX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Bex2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Bex2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BEX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Bex2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Bex2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BEX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BEX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.