beta Tubulin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400044-ACT

ヒトのTUBBは、微小管の中核的な構造サブユニットであるβチューブリンをコードしており、αチューブリンと重合して有糸分裂紡錘体を形成し、細胞骨格の構造を維持します。βチューブリンの動態は、微小管の継続的なリモデリングを通じて、染色体分配、キネシンおよびダイニンモーターによる細胞内輸送、細胞極性、ならびに繊毛関連プロセスを支えます。TUBBの機能は、細胞周期制御や、増殖・遊走を形作る微小管依存的シグナル伝達とも交差します。チューブリン発現や微小管挙動の変化は、染色体不安定性、神経発生および神経変性の機構、さらにはがん細胞生物学で見られる細胞骨格駆動の変化の研究に幅広く関与します。

beta Tubulin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TUBBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

beta Tubulin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TUBB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTUBB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性beta Tubulinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTUBB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるbeta Tubulin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTUBB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるbeta Tubulin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。