beta Synuclein Double Nickaseプラスミド (h): sc-400894-NIC

ヒトSNCBは、シナプス前終末の細胞質に存在するタンパク質であるβシヌクレインをコードしており、βシヌクレインはニューロンに豊富に発現して、シナプス小胞サイクリング、膜関連タンパク質間相互作用、神経伝達物質放出の調節に寄与します。シヌクレインファミリーの一員として、シャペロン介在性フォールディング、ユビキチン–プロテアソーム系による分解、オートファジー–リソソーム経路など、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）ネットワークと関わり、タンパク質凝集の動態に影響を与えます。βシヌクレインは、神経細胞の脆弱性やストレス応答の観点から研究されており、シナプス機能障害やミスフォールドタンパク質の処理異常を含む神経変性疾患メカニズムとの関連が示唆されています。その発現および生化学的相互作用は、シナプス前終末の恒常性が神経回路と細胞生存経路にどのように影響するかを解明するための枠組みを提供します。

beta Synuclein ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SNCB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SNCB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SNCBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SNCBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。