Particules Lentivirales d'Activation (m) beta-catenin: sc-419477-LAC

Le gène murin *Ctnnb1* code la bêta-caténine, une protéine multifonctionnelle qui couple l’adhésion cellule–cellule dépendante des cadhérines à des programmes transcriptionnels régis par la voie Wnt canonique. En l’absence de ligands Wnt, la bêta-caténine est ciblée pour phosphorylation puis dégradation par le complexe de destruction APC–AXIN–GSK3, tandis que l’activation de la voie stabilise la bêta-caténine et favorise son association nucléaire avec les facteurs de transcription TCF/LEF. Par ce mécanisme d’interrupteur, *Ctnnb1* régule la mise en place des patrons embryonnaires, le maintien des cellules souches et progénitrices, l’homéostasie épithéliale et la différenciation. Une signalisation de la bêta-caténine déréglée, ainsi qu’une dynamique altérée des jonctions d’adhérence, sont largement associées à la transformation oncogénique, à des phénotypes invasifs et à des anomalies du développement, faisant de *Ctnnb1* un nœud central dans les modèles de maladies axés sur les voies de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales beta-catenin (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ctnnb1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales beta-catenin (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ctnnb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de beta-catenin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ctnnb1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.