beta-catenin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400038-NIC

CTNNB1はヒトのβカテニンをコードしており、カドヘリン依存性の接着結合（アドヘレンスジャンクション）をアクチン細胞骨格につなぐ多機能タンパク質であると同時に、カノニカルWntシグナル伝達における転写共調節因子としても働きます。Wntリガンドが存在しない場合、βカテニンはAPC–AXIN–GSK3からなる分解複合体によってリン酸化され、プロテアソーム分解へと誘導されます。一方、経路が活性化するとβカテニンは安定化し、核内でTCF/LEF依存的な遺伝子プログラムの共活性化を促進して、増殖・分化・幹細胞維持を制御します。CTNNB1の活性化や安定化が異常に起こると、細胞運命決定、上皮の恒常性、発生パターニングが乱れ、がん化シグナルや組織特異的な異形成にしばしば関与します。細胞接着とWnt経路の出力を統合する結節的エフェクターとして、CTNNB1はEMT、接触阻害、オルガノイド生物学、Hippo経路や増殖因子シグナルとのクロストークなどの文脈で広く研究されています。

beta-catenin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CTNNB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CTNNB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CTNNB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CTNNB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。